ИММУНОФЕНОТИП МЕЗЕНХИМАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ЖИРОВОЙ ТКАНИ ПАЦИЕНТОВ С СЕРДЕЧНО СОСУДИСТЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ

Введение. Благодаря набору уникальных свойств, например, способность дифференцироваться в различные типы клеток соединительной ткани мезенхимальные стволовые клетки (МСК) привлекают все больше внимание исследователей. В 2001 г в стромально-васкулярной фракции жировой ткани обнаружили стволовые клетки, которые в отличие от МСК костного мозга они демонстрируют более высокую плотность в ткани, быстрее растут и доступны в большом количестве при сборе из небольшого объема жировой ткани. В настоящее время большое количество исследований посвящено изучению морфологии и иммунофенотипа подкожных и висцеральных стволовых клеток жировой ткани (СКЖТ) из-за возможности легкого получения клеток. Экспериментальных работ, направленных на изучение МСК кардиальной локализации, в настоящее время недостаточно.

Цель: оценить иммунофенотип стромальных клеток жировой ткани, выделенных из жировых депо эпикардиальной и периваскулярной области у пациентов с ишемической болезнью сердца и приобретенными пороками сердца.

Материалы и методы. В исследование было включено 5 пациентов с ишемической болезнью сердца и 5 с приобретенными пороками сердца. Средний возраст 64,5±2,5 лет. Все пациенты имели показания для проведения открытого вмешательства на сердце – прямой реваскуляризации миокарда методом коронарного шунтирования (КШ) или операции на клапанах сердца. СКЖТ из биоптатов ЖТ подкожной, эпикардиальной и периваскулярной локализации (3-5 г.) которые были получены у пациентов во время оперативного вмешательства (КШ или коррекции пороков сердца) и выделены по методике Zeng G. [Zeng G. et al., 2013]. Когда клетки вырастали до 80–90 % слияния, их расщепляли 0,25 % трипсином, и подвергали непрерывному росту и пролиферации клеток для последующих экспериментальных анализов. Анализ проточной цитометрии выполняли на клетках 2 пассажа.

Результаты: Полученные результаты показали, что культура МСК 2-го пассажа характеризовалась повышенной экспрессией антигенов CD73, CD90, CD105. Примерно 90 % клеток 2-го пассажа, полученных из эпикардиальной жировой ткани (ЭЖТ) и периваскулярной жировой ткани (ПВЖТ) пациента с ишемической болезнью сердца (ИБС), экспресировали классические маркеры МСК (CD73, CD90, CD105). В культуре клеток ЭЖТ у пациента с приобретеными пороками сердца (ППС) мы наблюдали более низкий уровень совместной экспрессии основных маркеров стволовых клеток, в отличие от пациента с ИБС (СD90 и СD105 около 61 % клеток, а СD90 и СD73 - 58,72 %). Процентное содержание изучаемых стволовых маркеров на клетках, выделенных из ПВЖТ у пациента с пороком сердца, существенно не отличалось от уровня экспрессии этих маркеров у пациента с ИБС. Уровень экспрессии СD34 варьировал в зависимости от локализации ЖТ и заболевания: так у пациентов с ИБС уровень СD34 не превышал 3,5 % как в эпикардиальной, так и периваскулярной ЖТ. При этом в эпикардиальной жировой ткани у пациента с ППС обнаружен более высокий процент СD34 (32,32 %). Стоит отметить, что кроме основной популяции как в культуре ЭЖТ, так и в ПВЖТ присутствовали 2 минорные: 1 - CD 90- CD 105+ CD 34-/+ CD 73+ – предположительно эндотелиальная популяция, 2 - CD 90+ CD 105- CD 34- CD 73- - самая малочисленная популяция.

Вывод: На ранних сроках культивирования клетки стромально-васкулярной фракции, выделенные из эпикардиальной и периваскулярной жировой ткани, экспрессируют поверхностные маркеры характерные для стволовых клеток жировой ткани.