ОЦЕНКА ЛОКАЛЬНОГО ПРОФИЛЯ ЦИТОКИНОВ, ЭКСПРЕССИРУЕМЫХ НАТИВНЫМИ КЛАПАНАМИ СЕРДЦА, ПОЛУЧЕННЫМИ ОТ ПАЦИЕНТОВ С ПРИОБРЕТЕННЫМИ ПОРОКАМИ СЕРДЦА

Ведение. Патогенез приобретенных пороков сердца представляет собой комплексный процесс, в который вовлечено множество различных факторов. Одним из триггеров развития дисфункций нативных клапанов сердца может выступать воспалительный процесс, вызванный различными видами патогенов.

Целью исследования была оценка локального профиля цитокинов, экспрессируемых нативными клапанами сердца, полученными от пациентов с приобретенными пороками сердца в процессе кардиохирургического вмешательства.

Материалы и методы: В качестве материала для исследования были получены биоптаты нативных митральных клапанов сердца от 4 пациентов с инфекционным эндокардитом и от 10 пациентов с ревматической болезнью сердца. Для выделения РНК использовали коммерческий набор RNeasy^® Plus Universal Mini Kit (“Qiagen”, Германия), экстракцию белка проводили с применением лизирующего буфера T-PER™ Tissue Protein Extraction Reagent (“ThermoScientific”, США) с добавлением ингибиторов протеаз Halt™ Protease Inhibitor Cocktail (“ThermoScientific”, США) и 0.5M раствора ЭДТА (“ThermoScientific”, США). Уровень экспрессируемых нативными клапанами цитокинов определяли с помощью дот-блоттинга с использованием набора Proteome Profiler™ Human Cytokine Array Kit (ARY005B) (R&D Systems, США). Экспрессию генов цитокинов оценивали методом кПЦР с использованием SYBR Green зондов (ЗАО “Евроген”, Россия) на амплификаторе ViiA7 Real-Time PCR System (“Applied Biosystems”, США). Статистический анализ полученных результатов был выполнен в программе GraphPad Prism 8 (“GraphPad Software”, США).

Результаты: Обнаружено, что белки MIF (фактор, ингибирующий миграцию макрофагов), PAI-1 (ингибитор активатора плазминогена-1), ICAM-1 (молекула межклеточной адгезии-1) и CXCL12 (стромальный фактор роста-1) регистрируются в нативных клапанах, полученных и от пациентов с ИЭ, и от пациентов с РБС. Полуколичественный анализ показал, что нативные клапаны, полученные от пациентов с ИЭ, характеризуются четырехкратным превышением уровня секреции PAI-1 и двукратным снижением уровня ICAM-1 и CXCL12 в сравнении с контролем. MIF экспрессировался на одинаковом уровне в обеих изученных группах. IL-1ra (антагонист рецептора интерлейкина 1), IL-6 (интерлейкин 6), IL-8 (интерлейкин 8), IL-16 (интерлейкин 16), CCL4 (хемокиновый лиганд 4), CCL5 (хемокиновый лиганд 5) и CXCL1 (хемокиновый лиганд 1) были обнаружены только в клапанах, пораженных ИЭ. Экспрессия генов MIF, IL6 и IL8 была повышена в экспериментальной группе относительно контроля, а генов PAI1, IL1RA и CXCL1– понижена в эксперименте относительно контроля. Генная экспрессия ICAM1, CXCL12, CCL4, CCL5 и IL16 была одинакова в обеих изученных группах.

Выводы: Результаты проведенного исследования показывают, что нативные клапаны сердца, пораженные ИЭ, характеризуются уникальным цитокиновым профилем по сравнению с клапанами, полученными от пациентов с неинфекционной патологией эндокарда. В пораженных ИЭ нативных клапанах сердца отмечается неспецифическое локальное воспаление, активная неоваскуляризация и снижение резистентности к патогенной бактериемии.