Введение. Доксорубицин – антибиотик антрациклинового ряда широко используемый в терапии злокачественных новообразований. Показано, что антрациклины обладают нежелательным побочным эффектом, который связан с развитием кардиотоксических эффектов. Нас сегодняшний день перспективным направлением фундаментальной и практической медицины является поиск высокочувствительных, высокоспецифических маркеров для ранней диагностики кардиотоксических эффектов антибиотиков антрациклинового ряда. Так, последние пять лет особое внимание уделяется циркулирующим микроРНК, представляющие собой небольшие последовательности (19-25 нуклеотидов) и регулирующие экспрессию генов на посттранскрипционном уровне. Отмечается важная роль микроРНК во многих физиологических и патологических процессах, в связи с чем их можно рассматривать как диагностические и терапевтические мишени.
Цель исследования: Оценить уровень экспрессии циркулирующих микроРНК в динамике, у пациенток с раком молочной железы, получающих терапию антрациклинами.
Материалы и методы. У 15 женщин с верифицированным диагнозом «рак молочной железы», терапия которых включала антрациклины, произведен забор венозной крови в вакутейнеры с К3ЭДТА в двух временных точках: до начала лечения и спустя 6 месяцев после начала химиотерапии. Полученную плазму, после центрифугирования, использовали для выделения микроРНК коммерческими наборами компании Qiagen (кат.номер 217184). Измерение количества выделенной микроРНК проводили на приборе Qubit 4 (Thermofisher Scientific, США) с использованием набора Qubit™ microRNA Assay Kits (кат.номер Q32881). Методом кПЦР после обратной транскрипции, определяли уровень циркулирующих микроРНК (hsa-mir-1-3p, hsa-mir-200a-3p, hsa-mir-21-3p, hsa-mir-133b, hsa-mir-429, hsa-mir-30a-3p). Для нормализации результатов использовали hsa-mir-486-5p. Относительный уровень экспрессии рассчитывали по методу ΔСt. Результаты выражали в виде кратного изменения. Статистическую обработку осуществляли при помощи программы «GraphPad Prism 8».
Результаты. Проведенное исследование показало изменение уровня экспрессии циркулирующих микроРНК через 6 месяцев после начала терапии антрациклинами. Выявлено знчительное снижение экспрессии следующих циркулирующих микроРНК: hsa-mir-1-3p, hsa-mir-200a-3p, hsa-mir-133b, hsa-mir-30a-3p. Для hsa-mir-21-3p и hsa-mir-429 не получено статистически значимых различий.
Выводы. Определены четыре микроРНК, экспрессия которых снижается спустя 6 месяцев после приема доксирубицина, что говорит о влиянии антрациклинов на экспрессию генов и, возможно, на эпигенетическое регулирование патологических процессов, связанных с кардиотоксическими эффектами терапии. Для подтверждения полученных результатов необходима валидизация экспрессии на большей выборке пациентов.
Introduction. Doxorubicin is an anthracycline antibiotic widely used in the treatment of malignant neoplasms. Anthracyclines have been shown to have an undesirable side effect associated with the development of cardiotoxic effects. Today, a promising direction in fundamental and practical medicine is the search for highly sensitive, highly specific markers for the early diagnosis of cardiotoxic effects of anthracycline antibiotics. Thus, for the last five years, special attention has been paid to circulating miRNAs, which are small sequences (19-25 nucleotides) and regulate gene expression at the post-transcriptional level. An important role of microRNAs in many physiological and pathological processes is noted, and therefore they can be considered as diagnostic and therapeutic targets.
Purpose of the study: To assess the level of expression of circulating miRNAs in dynamics in patients with breast cancer receiving anthracyclines therapy.
Materials and methods. In 15 women with a verified diagnosis of breast cancer, whose therapy included anthracyclines, venous blood was taken into vacutainers with K3EDTA at two time points: before the start of treatment and 6 months after the start of chemotherapy. The resulting plasma, after centrifugation, was used for microRNA isolation using commercial kits from Qiagen (cat. no. 217184). The amount of isolated miRNA was measured on a Qubit 4 instrument (Thermofisher Scientific, USA) using the Qubit™ microRNA Assay Kits (cat. no. Q32881). The level of circulating miRNAs (hsa-mir-1-3p, hsa-mir-200a-3p, hsa-mir-21-3p, hsa-mir-133b, hsa-mir-429, hsa-mir -30a-3p). hsa-mir-486-5p was used to normalize the results. The relative expression level was calculated using the ΔСt method. The results were expressed as fold change. Statistical processing was carried out using the program "GraphPad Prism 8".
Results. The study showed a change in the expression level of circulating miRNAs 6 months after the start of anthracycline therapy. A significant decrease in the expression of the following circulating miRNAs was revealed: hsa-mir-1-3p, hsa-mir-200a-3p, hsa-mir-133b, hsa-mir-30a-3p. For hsa-mir-21-3p and hsa-mir-429 no statistically significant differences were obtained.
Conclusions. Four microRNAs were identified, the expression of which decreases 6 months after doxorubicin administration, which indicates the influence of anthracyclines on gene expression and, possibly, on the epigenetic regulation of pathological processes associated with cardiotoxic effects of therapy. Validation of the expression in a larger sample of patients is required to confirm the results obtained.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.